Nghiên cứu và đánh giá chất sinh ung thư

Chất sinh ung thư được nghiên cứu với nhiều xét nghiệm độc học tiêu chuẩn hóa khác nhau. Phần đầu tiên của các thử nghiệm này được thực hiện trong ống nghiệm, và - nếu chúng dương tính - chúng tôi sẽ tiến hành thử nghiệm in vivo. Phương pháp tiếp cận từng bước thử nghiệm này được gọi là TIẾP CẬN ĐIỂM QUYẾT ĐỊNH, một chuỗi các thử nghiệm dừng lại ở cuối mỗi thử nghiệm để quyết định cách thức tiến hành thử nghiệm. Có năm giai đoạn:

GIAI ĐOẠN A: cấu trúc và đặc điểm của hợp chất gây ung thư;

PHASEB: trong giai đoạn thử nghiệm trong ống nghiệm ngắn hạn này, tế bào động vật có vú được sử dụng. Các tế bào được sử dụng phổ biến nhất là tế bào gan, vì mức độ sửa chữa các tổn thương mà tế bào gan phát triển theo mức độ nghiêm trọng của tổn thương do chất gây ra được nghiên cứu. Tóm lại, chúng tôi xác định không phải thiệt hại mà là mức độ hoạt động của hệ thống sửa chữa được tế bào gan.

Quy trình được thực hiện là cấy 3 tế bào gan.Trong lần nuôi cấy đầu tiên, các tế bào gan khỏe mạnh, trong lần thứ hai chúng được xử lý bằng chất thử nghiệm và cuối cùng trong lần nuôi thứ ba chúng được xử lý bằng chất kiểm soát chắc chắn là chất gây ung thư. Ba nền văn hóa này chứa một cơ sở pyrimidine phóng xạ, là thymidine tritiated, hoạt động như một chất đánh dấu.

Nếu hợp chất đang được kiểm tra gây ra đột biến trong DNA, tế bào sẽ phản ứng với vấn đề này bằng cách kích hoạt hệ thống sửa chữa. Đoạn DNA đã trải qua đột biến bị cắt và nhờ tác động của DNApolymerase, đoạn bị thiếu được thay thế bằng một đoạn mới. Để chỉnh sửa, DNApolymerase sử dụng các bazơ mới, bao gồm thymidine tritiated, một bazơ phóng xạ được đưa vào. Việc phân tích độ phóng xạ xác định mức độ đột biến trong các tế bào được xử lý: độ phóng xạ càng cao thì các đột biến DNA càng lớn.

Ngoài ra, trong giai đoạn B, các xét nghiệm cũng được thực hiện trên vi khuẩn, để có thể nghiên cứu xem có bất kỳ đột biến đảo ngược nào không. Vi khuẩn được sử dụng là salmonellae đã mang đột biến. Sự đột biến liên quan đến sự tổng hợp histidine, vì vậy vi khuẩn salmonellae không thể phát triển nếu không có histidine. Các khuẩn lạc vi khuẩn này một phần được đem đi xử lý với chất thử, một phần để kiểm chứng âm tính và một phần để kiểm chứng dương tính, sau đó được kiểm tra với chất gây ung thư đã biết. Nếu chất thử này là chất gây độc gen gián tiếp, thì các enzym chuyển hóa phải được đưa vào môi trường nuôi cấy. Tại thời điểm này, có 3 mẫu cấy sẽ được gieo hạt và phát triển trong đĩa petri (không có histidine trong môi trường nuôi cấy). Nếu không có bất kỳ đột biến nào của chất gây ung thư cần kiểm tra thì về lý thuyết không có bất kỳ sự đột biến nào trên đĩa. . Nếu có tác động gây đột biến của chất gây ung thư, nó có thể đã thay đổi đột biến đầu tiên và tạo ra đột biến thứ hai có khả năng phát triển vi khuẩn trên môi trường nuôi cấy không có histidine. Trong trường hợp này, đột biến thứ hai mà nó biến đổi đột biến đầu tiên và lấy tên là RETROMUTATION Cuối cùng, nếu sự phát triển đáng kể xảy ra ở piasta petri, thì chất gây ung thư là trực tiếp.
Với xét nghiệm in vitro luôn có thể xác định được tính toàn vẹn của nhiễm sắc thể, xét nghiệm này luôn được thực hiện trên tế bào động vật có vú và dùng để kiểm tra các chất độc hại có khả năng gây đột biến trên một số enzym chịu trách nhiệm sinh tổng hợp ADN của chất cần xét nghiệm. Được phân tích trong ống nghiệm Để có thể xác định liệu chất được kiểm tra có ảnh hưởng đến tính toàn vẹn và số lượng nhiễm sắc thể hiện có hay không, xét nghiệm vi nhân được sử dụng. Vi nhân là những túi được hình thành với một phần chất nhiễm sắc bên trong. Chất nhiễm sắc kết hợp trong các vi nhân này có thể là toàn bộ nhiễm sắc thể hoặc các đoạn nhiễm sắc thể. Các vi nhân được hình thành do sự phân chia tế bào sai lầm làm phát sinh các tế bào con có vật chất di truyền không bằng nhau được phân phối. Kết quả của thử nghiệm này sẽ là xác định các chất được xác định là chất độc tạo sợi và chất độc trục chính. Chất tạo xương tạo ra các vi hạt nhân với các đoạn tâm của nhiễm sắc thể do đó chất gây ra sự đứt gãy trong nhiễm sắc thể, thay vào đó chất độc của trục quay tạo ra các vi nhân mà bên trong nó là các nhiễm sắc thể nguyên vẹn.
Nếu chất được kiểm tra gây ra độc tính gen trong một hoặc nhiều phép thử, thì điều này được xác định là rất đáng ngờ, vì vậy nó chuyển trực tiếp sang giai đoạn D. Mặt khác, nếu chất được thử nghiệm không tạo ra bất kỳ tác dụng gây độc gen nào, nó sẽ chuyển sang giai đoạn nghiên cứu. C vì nó có thể là một người xúc tiến.

FASEC: trong giai đoạn này có thể thực hiện cả xét nghiệm in vitro và in vivo.

Đối với các thử nghiệm in vitro, người ta có thể chứng minh được khả năng của chất thúc đẩy phá vỡ các điểm nối giữa các tế bào bình thường và tế bào khối u, do đó dẫn đến việc truyền các chất giữa hai tế bào.

Thử nghiệm in vivo là sự cảm ứng của các khối u da ở chuột. Chất cần thử nghiệm được bôi hai hoặc ba lần trong một tuần lên da của chuột. Trong vòng 2/3 tháng nếu chất này là chất xúc tiến thì có thể hình thành u nhú. Ở chuột, hai dữ liệu chính được xem xét: số lượng chuột bị ảnh hưởng bởi u nhú và số lượng u nhú hiện có trên mỗi con vật. Nếu chất này hoạt động như một chất thúc đẩy và phát triển một khối u ở con chuột được điều trị thì điều đó có nghĩa là nó thực sự là một chất có tác dụng thúc đẩy.

Sau khi hoàn thành các thử nghiệm này, chúng tôi chuyển sang các thử nghiệm in vivo dài hạn.

FASED: trong giai đoạn này, tất cả các hợp chất chứng minh được khả năng gây đột biến và tất cả các hợp chất không chứng minh được khả năng gây đột biến đều được kiểm tra. Các xét nghiệm có thể được thực hiện là khác nhau, một số xét nghiệm được thực hiện trên gan, trên phổi và cuối cùng là trên vú.

Xét nghiệm gan cho thấy sự hình thành không phải của một khối u mới hình thành, mà là một khối u tân sinh, do đó một thứ gì đó đang chuẩn bị trở thành một khối u. Các tế bào của tiêu điểm này đã là các tế bào không điển hình, do đó chúng đã trải qua một đột biến và chuẩn bị trở thành tế bào tân sinh. Sau một thời gian nhất định, nhờ khám nghiệm tử thi, việc hình thành các tiêu điểm tiền ung thư được xác định, bằng cách tính toán số lượng và mức độ của các hình thành tiền ung thư này.

Xét nghiệm phổi cho phép xác định u tuyến, là một "dị thường của tế bào mô phổi. Cũng trong trường hợp này, mô phổi của chuột được kiểm tra sau một thời gian khá dài (nhiều tháng) (những u tuyến này có thể dễ dàng xác định được vì là những nốt trắng trên biểu mô phổi).
Kiểm tra vú cho phép xác định các khối u trong mô tuyến. Số lượng u tuyến được hình thành và số lượng động vật có biểu hiện u tuyến luôn được đánh giá.

Nếu có kết quả dương tính từ các xét nghiệm này thì chất thử nghiệm thực sự là chất gây ung thư. Tại thời điểm này, chúng tôi chuyển sang thực hiện các thử nghiệm tốn kém với thời gian thực hiện rất lâu.

PHASEE: trong giai đoạn này, một số lượng khác nhau của động vật, từ 20 đến 50 con, phải chịu các thử nghiệm dài hạn, những thử nghiệm này rất tốn kém và mất nhiều thời gian để thu được kết quả nhất định; chúng ta nói đến khoảng 1/8 tuổi thọ của động vật. Có thể trong quá trình thực hiện các xét nghiệm này, một số động vật chết, nhưng chúng luôn được nghiên cứu với việc khám nghiệm tử thi và kiểm tra loại mô học. Những con vật được chọn luôn là chuột cống và chuột nhắt và chỉ 70-80% sống sót cho đến khi kết thúc các bài kiểm tra dài hạn. Những con vật được sử dụng chỉ mới cai sữa, khi chúng càng nhỏ, chúng càng nhạy cảm hơn với các phương pháp điều trị. Trong suốt thời gian thử nghiệm dài hạn, nhà nghiên cứu luôn được hỗ trợ bởi một nhà toán học-thống kê, có thể tính đến tất cả các thông tin thu thập được và tái tạo các dữ liệu khác nhau.

Các liều thử nghiệm trên động vật bắt đầu từ liều dung nạp tối đa và tất cả các phân nhánh của nó, và phản ứng đáp ứng với liều lượng ở động vật được đánh giá.
Việc quản lý phải luôn tiếp cận với con đường mà người đàn ông có thể tiếp xúc với chất được kiểm tra, do đó, đường miệng, da hoặc đường hô hấp, trong khi nếu tính gây ung thư của một loại thuốc được kiểm tra thì việc tiêm tĩnh mạch cũng rất hữu ích.
Các nhóm động vật được thử nghiệm là 4 (50 con cho mỗi nhóm):

Một nhóm NAIF không có phương pháp điều trị;
Một nhóm điều trị bằng phương tiện;
Một nhóm được xử lý bằng chất thử nghiệm;
Một nhóm được điều trị bằng chất gây ung thư đã biết.

Điều rất quan trọng là số lượng động vật trong mỗi nhóm càng bằng nhau càng tốt.
Các đánh giá được thực hiện là:

Tổng tần suất của các khối u;
Tần suất của một số khối u;
Tần suất động vật có nhiều hơn một loại khối u;
Số lượng bệnh ung thư động vật.

Vào cuối tất cả các giai đoạn nghiên cứu này, chất này được xếp vào bảng xếp hạng do IARC (Cơ quan Nghiên cứu và Phát triển Quốc tế về Ung thư) và Cơ quan Bảo vệ Môi trường (EPA) thiết lập.